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“上海恒远”文献:β-胡萝卜素对高糖诱导的 血管内皮细胞损伤的保护作用

点击次数:142 发布时间:2019/4/3
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邱模昌蔡灵卿 刘建明程畅

江西医学高等专科学校药学系江西  上饶334000

 

摘要目的     研究β胡萝卜素β对高糖诱导的内皮细胞损伤的保护作用并初步探讨其作用机制方法     血管内皮细胞长至80% 以上融合时将其分为正常对照组高糖损伤组及低中和高剂量β 每组 个复正常对照组加入10% 葡萄糖注射液5.5 ·-1 高糖损伤组加入10% 葡萄糖注射液33 ·-1 

中和高剂量β 组分别加入βC102040μ·-1 +10% 葡萄糖注射液33 ·-1 各组放置5%CO 养箱中培养48收集细胞或培养液进行实验使用酶联免疫检测仪采用  MTT 比色法检测 组血管内皮细

胞存活率采用流式细胞仪检测血管内皮细胞凋亡率血管内皮细胞中活性氧ROS水平使用全自动生化仪用乳酸丙酮酸连续监测法检测组血管内皮细胞培养液中乳酸脱氢酶LDH活性使用全自动生化仪采用硫代巴比妥酸比色定量法检测组血管内皮细胞培养液中丙二醛MDA的水平先参照   NO 检测试剂盒的使用说明书进行实验后采用酶联免疫检测仪检测组血管内皮细胞培养液中 NO 水平结果 与正常对照组比较高糖损伤组的血管内皮细胞存活率血管内皮细胞培养液中 NO 水平均明显降低血管内皮细胞培养液中 LDH 活性

MDA 水平血管内皮细胞凋亡率血管内皮细胞中 ROS水平均明显升高 0.01);与高糖损伤组比较剂量β 组的血管内皮细胞存活率血管内皮细胞培养液中 NO 水平均明显升高血管内皮细胞培养液中 LDH MDA 水平及低中和高剂量β 组的血管内皮细胞凋亡率血管内皮细胞中 ROS水平均明显降低0.05

0.01结论    β胡萝卜素对高糖诱导的脐静脉内皮细胞的损伤具有保护作用其机制可能与增加 NO 水平和

促进 ROS的降解有关

关键词糖尿病β胡萝卜素高糖血管内皮细胞损伤活性氧脐静脉保护作用

中图分类号R96R587.1      文献标志码       文章编号2095-4727201407-0024-05

 

β胡萝卜素βenβ是常见类胡萝卜素之一类胡萝卜素呈现很强的抗氧化性具有清除

自由基保护血管抗肿瘤护肤增强免疫功能及保护神经系统等作用有研究发现β 能充分提

NO 的水平和生物利用度舒张血管保护血管

同时β还能抑制 ROS水平的升高保持机体抗氧化能力和不断产生的氧自由基的氧化能力之间的动态平衡预防动脉粥样硬化等的发生β对高糖

诱导的血管内皮细胞损伤的保护效应目前研究较

本研究观察了β对血管内皮细胞损伤的保护效应并从 ROSNO 途径探讨β对血管内皮细胞损伤的保护效应机制

 

材料与方法

1.1  实验材料

人脐静脉内皮细胞株 HUVEC19 购自中南大源自 ATCC 细胞库DMEM 培养基上海恒远生物科技有限公司MTT 溶液 

LDMSO     LDH       

MDA试剂盒海门市碧云天生物技术研究所

沙长锦应用技术研究所652 酶联免疫检测仪BIORAD 公司DXC600全自动生化分析仪  公司FACSCALIBUR 流式细胞仪

美国BD 公司

1.2  实验方法

1.2.1  血管内皮细胞培养与实验分组加药方法

将人脐静脉内皮细胞株 HUVEC19 传代至代后用20%DMEM10% 胎牛血清悬浮细计数后以5×10孔的细胞数接种于六孔板培养板中 细胞长至 80% 以上融合时进行实验

在血管内皮细胞长至80% 以上融合时将其分为

正常对照组高糖损伤组及低中和高剂量β每组个复孔正常对照组加入10% 葡萄糖注射液5.5 ·-1高糖损伤组加入10% 葡萄糖注射液33 ·-1中和高剂量β 组分别加入βC102040μ·-1+10%葡萄糖注射液33 ·-1各组放置5%CO  培养箱中培养48收集细胞或培养液进行实验将传代至代的血管内皮细胞分为正常对照组高糖损伤组及低中和高剂量β

1.2.2  血管内皮细胞存活率的检测

传 代至第 代的血管内皮细胞20%DMEM10%胎牛血清悬浮细胞后以每孔10         96       200μ每组接种 个复孔待细胞贴壁后 加药正常 对照组高 糖损伤组及低中 和高剂量β组加药同1.2.1 加药后放置5%CO 培养箱中培养24培养24每孔加入 MTT 溶液·-1 15μ再放置 5%CO  培养箱中培养4h培养4h小心吸弃孔内培养上清液

 

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