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“上海恒远”文献:复合载蛇床子素支架材料修复兔下颌骨缺损的实验研究

点击次数:153 发布时间:2019/5/24
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实验研究

郭延伟 李松 房殿吉*

(佳木斯大学附属口腔医院颌面外科 黑龙江  佳木斯    154000)

 

[摘要] 目的:探讨 BMSCs/PRF 复合载蛇床子素支架材料修复兔下颌骨缺损的实验研究的可行性。方法:36 只新西兰大白兔随机分为3组,每组12只,双侧下颌骨制备缺损模型。A 组植入 BMSCs/PRF 复合载蛇床子素支架材料;B 组植入 BMSCs复合载蛇床子素支架材料,C 组单植入纳米羟基磷灰石支架材料。分别于术后2、4、8、12 周处死实验动物,制备组织标本,行大体观察、影像学分析、HE 染色、扫描电镜检测,并对影像学分析值及成骨情况加以评价,对分析数据结果使用SPSS17.0统计软件进行分析,P <0.05 有统计意义。结果:影像学检查及组织学染色显示 A 组骨缺损处愈合程度,成骨速度及其质量明显优于 B组C 组;扫描电镜显示 A 组该复合材料与组织相容性好,无炎症刺激反应;统计牙 CT 分析数据及新生骨面积,A 组的成骨情况明显优于B 组与C 组(P <0.05)。结论:BMSCs/PRF 复合载蛇床子素支架材料有明显骨诱导作用,是一种新型复合材料,可望成为临床应用中修复颌骨缺损的新型材料。

 

[关键词] 骨  颌骨缺损  骨髓间充质干细胞 BMSCs   富血小板纤维蛋白 PRF   蛇床子素 Osthol

[中图分类号] R782.4

[文献标识码] A

[文章编号] 1671—7651(2012)11—1087—05

 

下颌骨功能结构复杂,而造成其缺损的原因也很多,若不及时进行修复或修复不当,则常常会造成骨不连或延迟愈合等严重后果。随着当代组织工程学及分子生物学的迅猛发展,利用干细胞作为种子细胞复合支架材料修复骨缺损成为近年来研究的热点,骨髓间充质干细胞(BM- MSCs)以其多项分化的潜能及自身所具有的遗传背景稳定和对机体无免疫排斥反应等优点成为理想的种子细胞[1~3]。PRF是继富血小板血浆(platelet-richplasma,PRP)后第2代血小板浓缩液,以血小板凝胶形式呈现,其所内含的高浓度的生长因子能促进骨组织和软组织再生修复,单独或联合其他生物材料注人硬组织缺损或软组织创伤处,可以修补缺损,诱导生长,加速局部创伤的愈合并提高愈合质量[4~6]。实验证明,蛇床子素 可 促 进 大 鼠 骨 髓 间 充 质 干 细 胞 (BM -MSCs)的增殖及向成骨细胞分化并抑制其向脂肪细胞分化,而且蛇床子素具有促进成骨细胞增殖的能力[7,8]。本研究将骨髓间充质干细胞作为种子细胞,以载蛇床子素的羟基磷灰石为支架材料,结合PRF 中多种生长因子及其诱导并促进成骨修复兔下颌骨缺损,为临床应用提供了理论依据。

1 材料与方法

1.1   实验动物 健康新西兰大白兔36 只,体重2.

0~3.0kg,3~6月龄,雌雄不限,(由佳木斯大学动物实验中心提供),材料及仪器:医用纳米级羟基磷灰石(上海源叶生物科技有限公司),蛇床子素(上海恒远生物科技有限公司),离心机,JSM -6360LV扫描电镜,倒置相差显微镜,牙 CT。

1.1.1   骨髓间充质干细胞的获取及培养 无菌条件下,骨髓穿刺针兔双侧股骨大转子处抽取骨髓3~5 mL,然后加入 20 mL 的 DMEM 培养液中混匀,过滤杂质后以1500r/min 离心20 min,离心完后取上层骨髓,加入5 mL 制成 DMEM 培养液制成单细胞悬液(细胞数为10 个/mL),然后置入容积为30 mL 的培养瓶中,加入10mL 含20%新生小牛血清、青霉 素 100 U/mL、硫 酸链霉素 100g/mL 的DMEM 培养液,再次离心1200r/min离心10 min,去上清,计数。然后置入37 ℃、5%CO2  培养箱内培养。细胞培养24h贴壁,呈梭形成纤维样细胞生长,72h后大量细胞成纤维样生长,部分区域成漩涡样细胞群,见图1。在细胞种植的第4 天第1 次换液,以后每2d换液1 次,细胞生长7~10d 后长满瓶底面积的80%时2.5%胰蛋白酶收集计数并传代。

 

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