酶联免疫检测方法有间接法，阻断法，竞争法，夹心法等。夹心法中，包被的抗体与酶标抗体，假如是单抗，理论是不能用一样的，不外商品化的单抗有可能是混合单抗，识别不同的表位的抗体混在一起，这样就又可以用一样的。在今天的技术下载内容中，是恒远为您分享酶联免疫双抗夹心法检测攻略：

一、标本因素不可忽略

    1.振荡提取

    将提取溶剂加入到装有样品的具塞容器中，振荡，使提取溶剂与容器内的样品充分接触以深入到样本组织内部，提取待测组分。

    ① 振荡方式：振荡器上进行上下、往返式振荡、手摇式上下振荡。

    ② 在组织样本中加入有机溶剂之间提取时，应边加边振荡，防止组织凝结成团，不利于提取。

    3.在用有机溶剂提取过程中，如果出现乳化现象，解决的方法有：①用细头轻轻的搅拌，破坏乳化后，再重复离心。②再加入适量的提取剂，重新振荡。注意离心后要保证样本的稀释倍数不变。

    4.浓缩

    由于净化过程中引入的溶剂，可能会降低待测组分的浓度或者不适宜直接分析，需要去除全部有机溶剂。即试剂盒前处理步骤中把样本在60℃氮气下吹干，再用复溶液溶解干燥残留物。

    浓缩方式：氮气吹干除杂、压缩空气吹干除杂。

    注意：

    ① 在吹干样本之前，用甲醇清洗针头，防止杂质干扰。

    ② 在吹样本时，针头应在液面上空，避免与样本接触，防止产生交叉污染。

    ③ 样本吹干后应立即取下，避免吹的时间过长，影响zui终检测结果。

    ④ 不同的药物，吹干后样本的保质期不同，提倡待样本回到室温后立即复溶。

    5.净化

    经过提取的待测组分中通常含有一些会干扰试剂盒中抗原抗体反应的杂质或者是含有与待测物结构相似的杂质。将待测组分与杂质分离的过程，我们称为试剂盒中样本的净化。在我们现有的试剂盒前处理方法中涉及到的zui常见的净化是液液分配法。

二、试剂盒的灵敏度也是关键之一

    一般说来，如果待测样本中目标蛋白的浓度比较高，则对灵敏度要求相对小一些。如果待测样本中目标蛋白的浓度比较低，则必须考虑灵敏度的问题。试剂盒曲线上的zui小浓度是比较准确的，低于这个值因为与曲线是个“S"型结构有关，所以结果是有偏差的，是一种估算。再加上实验误差，所以达不到理想的效果。建议选择试剂盒时，应该看曲线上zui小的浓度值，而不是试剂盒上写的灵敏度。

    相对灵敏度=真阳性/(真阳性+假阴性)×100%

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