在实验室，对试剂准备一般不太注意，通常的做法是，在实验时将试剂从冰箱中拿出来即用，而忽略了这种做法有可能影响后面温育时间不够的问题，ELISA试剂盒其直接的后果是对一些弱阳性标本的检测出现假阴性。因此在实验开始前，将试剂盒先从冰箱中拿出来，在室温下放置20分钟以上后，再进行测定，以使试剂盒在使用前与室温平衡。这样做的目的，主要是为了在后面的温育反应步骤中，能使反应微孔内的温度能较快地达到所要求的高度，以满足测定要求。其次，上海恒远生化试剂有限公司还指出以下几点：

ELISA试剂盒的操作步骤
1、取出试剂盒，室温（20-25℃）放置30分钟。
2、分组：取出96孔板，根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数，把剩余的板条继续冷藏处理。分别设标准品组（6个浓度）、空白孔、待测样品组。
3、标准品的稀释：准备小试管6 只，依次编好号码，先在各小试管中加入标准品稀释液100ul，然后取原浓度标准品100ul加入一只已编好号的试管中，充分混匀;再在该试管中取100ul 加入第二支试管中，充分混匀；再在该试管中取100ul加入第三只试管中，充分混匀；再在该试管中取100ul 加入第四只试管中，充分混匀；再在该试管中取100ul加入第五只试管中，充分混匀；然后在该试管中取100ul，弃掉。第六只试管作为0 号标准品。
注：为减少实验误差，保证准确性，建议设置复孔。
4、加样：依照标准品的顺序分别加入50ul的标准品溶液于空白微孔中；空白对照孔加入50ul的蒸馏水；其余微孔中先加样品40ul然后再加生物素标记的抗体10ul。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
5、温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
6、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒弃去，如此重复5 次，拍干。
7、加酶标溶液：标准品组、待测样本组各孔中加入50ul的酶标溶液（空白对照孔除外）。
8、温育：酶标板用封板纸密封后，放入湿盒内于37℃恒温孵育1小时。
9、洗板：用稀释后的洗涤液注满每孔，静置15-30s，充分清洗酶标板5次，用吸水纸*拍干。
10、显色：各孔加入显色剂A液50ul后，再加入显色剂B液50ul。
11、终止：25-37℃下避光反应10-15分钟，加入50ul终止液。
12、读板：在450nm波长读取各孔的OD值。
   
   目前的商品ELISA试剂盒中的洗板液均需在实验室使用时对所提供的浓缩液稀释配制， ELISA中用的蒸馏水或去离子水，包括用于洗涤的，应为新鲜的和高质量的。自配的缓冲液应用pH计测量较正。从冰箱中取出的试验用试剂应待温度与室温平衡后使用。试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保存.
   
   本公司提供的elisa试剂盒具有灵敏度高、质量可靠、操作简单等特点。欢迎新老客户。