ELISA试剂盒应严格遵照规定操作，必能得出准确的结果。首先应选取的试剂，良好的仪器和正确的操作是保证ELISA检测结果准确可靠的必要条件。所以ELISA试剂盒的购买，试剂质量的保证以及实验前实验仪器的检察都是很重要的。
 

一、标本的采集及保存
    1、血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
    2、血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
    3、细胞培养物上清或其它生物标本：请1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
    4、样本处理：血清或血浆标本推荐稀释10,000倍。
    注：以上标本置4℃保存应小于1周，-20℃或-80℃均应密封保存，-20℃不应超过1个月，-80℃不应超过2个月；标本溶血会影响zui后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
   

二、试剂的准备 
按试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂. ELISA中用的蒸馏水或去离子水,包括用于洗涤的,应为新鲜的和高质量的.自配的缓冲液应用pH计测量较正.从冰箱中取出的试 验用试剂应待温度与室温平衡后使用.试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保存。
 

三、加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
   

四、温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
   

五、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
   

六、显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
   

七、测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
   

    讲述完了以上ELISA实验的操作要点，可以发现其实很多步骤都并不复杂，重要的是操作的时候一定要注重细节，熟能生巧，才可以掌握ELISA实验的精髓所在。