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热爱ELISA实验的新手们需注意这些细节
点击次数:232 发布时间:2018-11-28

    今天,我公司技术专员特意为大家准备十几条ELISA操作的重点细节,阅读之后可以总结一下您在实验中有哪些重点被忽略掉了。热爱ELISA实验的新手们需注意这些细节:
 

  1.不管是试剂盒,还是其它产品,在使用之前我们都要仔细阅读说明书。
  2.同样的,一定要确定试剂盒是不是在有效期内。
  3.按说明书确定所有试剂齐全(数量、体积)。
  4.标本制备要规范,每份标本体积要按2-3个复孔以上的量制备(贮存),尽量分装做备份。短期内无法实验者,注意低温保存。
  5.ELISA实验中为了确定zui佳信号和低背景应将捕获抗体(0.5-4μg/ml)和检测抗体(0.25-2μg/ml)在预实验中进行彼此相抗的滴定。同时,应包括在适当范围内的标准品的系列稀释。按试剂说明书常规提供的范围进行操作。
  6.标准品的配制:对于每种细胞因子应仔细阅读说明书,注意每批的细节。在使用细胞因子前,瞬时离心试剂瓶,尽可能多地收回其中的细胞因子。根据每批说明书中的细节,将冻干的细胞因子复溶。
    
  7.一般待测抗原标准曲线的线性范围的可通过将标准品做8次2倍系列稀释从2000pg/ml到15pg/ml。可利用标准的elisa操作流程、放大试剂盒、第三类试剂、或改变酶底物系统可在一定范围内提高灵敏度。
  8.根据检测标本数量确定所需试剂的量。
  9.按说明书将所用试剂平衡至室温,配制所需试剂,DIY夹心法ELISA常见技术指南。
  10.选择抗体时zui好选择一个单抗和一个多抗进行配对;若选择两个单抗,必须识别不同表位的抗体;zui好从同一家公司选择抗体对。
  11.为了优化灵敏度,建议过夜孵育标准品和标本。
  12.若使用过氧化物酶作为显色系统,应严禁在洗液和稀释液中加叠氮钠,叠氮钠可抑制过氧化物酶的活性。
  13.当测定混合液体中的抗原时,如血清,建议在标本稀释液中加不相干的Ig。
  14.准备好所有实验额外所需物品,如试管、吸头、移液器、离心机等。
   

    了解更多ELISA实验技术资料,欢迎您致电给我公司业务员咨询。

 

 

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