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    酶联免疫吸附剂测定实验基本原理：
    1.使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。
    2.使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原 或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。
    3.在测定时，把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或 抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方 法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，后结合在 固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。
    4.加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量 与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅刊物定性 或定量分析。
    由于酶的催化频率很高，故可极大地地放大反应效果，从而使测 定方法达到很高的敏感度。 
        
酶联免疫DIY夹心法实验技术指南：
1.选择抗体时选择一个单抗和一个多抗进行配对；若选择两个单 抗，必须识别不同表位的抗体；从同一家公司选择抗体对。
2.为了确定*信号和低背景应将捕获抗体(0.5-4μg/ml)和检测抗 体(0.25-2μg/ml)在预实验中进行彼此相抗的滴定。同时，应包括在 适当范围内的标准品的系列稀释。按试剂说明书常规提供的范围进行 操作。
3.标准品的配制：对于每种细胞因子应仔细阅读说明书，注意每批的 细节。在使用细胞因子前，瞬时离心试剂瓶，尽可能多地收回其中的 细胞因子。根据每批说明书中的细节，将冻干的细胞因子复溶。
4.一般待测抗原标准曲线的线性范围的可通过将标准品做8次2倍系列 稀释从2000pg/ml 到15pg/ml。可利用标准的ELISA操作流程、放大试 剂盒、第三类试剂、或改变酶底物系统可在一定范围内提高灵敏度。
5.为了优化灵敏度，建议过夜孵育标准品和标本。
6.若使用过氧化物酶作为显色系统，应严禁在洗液和稀释液中加叠氮 钠，叠氮钠可抑制过氧化物酶的活性。
7.当测定混合液体中的抗原时，如血清，建议在标本稀释液中加不相 干的Ig.

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