ELISA试剂盒加样的优化:
在这一过程中,一般情况下有三次加样,它们分别是加标本,加酶联络物,加底物。小分子抗原比如多肽以及一些小分子有机化合物,由于分子量太小,一般难于直接吸附在酶标板上,一般都先使其与无关蛋白质,比如BSA等偶联,偶联物吸附于固相载体上。冻住血清融解后,蛋白质有些浓缩,散布不均,应充沛混匀宜轻缓,防止气泡,可上下倒置混和,不要在混匀器上剧烈振荡。也可在板孔中参与稀释液,再在其参与血清标本,然后在微型轰动器上轰动1分钟以确保混和。一般说来,在5天内测定的血清标本可放置于4℃,逾越一星期测定的需低温冰存。
ELISA试剂盒抗原包被选择:
兽药残留检测大部分药物因分子量小,难于直接吸附于固相载体上,因此需要将小分子药物经过改造成合适的半抗原,再将半抗原与大分子的载体蛋白偶联(通常是利用半抗原分子中含有一定数量的游离基团,如巯基、氨基、醛基、羧基、酮基、苯酚基、咪唑基等,这些基团可与蛋白质分了中的对应基团在偶联剂的作用下发生偶联反应),从而形成半抗原-载体蛋白复合物,半抗原-载体蛋白复合物通过载体蛋白吸附到固相载体上,实现小分子药物的包被过程。常用的载体蛋白有: 牛血清白蛋白(BSA) 、人血清白蛋白(HSA)、牛的免疫球蛋白(TRP)、鸡的卵清蛋(OVA)、血蓝蛋白(KLH)等。
ELISA试剂盒包被条件的优化:
包被液的选择:一般常用的是pH9.6的碳酸盐缓冲液,假设包被的抗原在碱性条件下不稳定的话,也可以使用pH7.2的磷酸盐缓冲液。制备血浆标本需借助于抗凝剂,而血清标本只需待血清天然凝结、缩短后即可取得。
包被浓度的选择:包被的zui适浓度随固相载体和包被物的性质改变,一般蛋白质的包被浓度为1-5ug/ml,要明晰关于特定包被抗原的zui适包被浓度需求经过实验来判定。
包被温度的选择:一般是4-8度条件下放置一个黑夜或许37度保温2小时,我们剧烈主张4-8度条件下包被,有利于蛋白活性的坚持。