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细胞冻存方法及目的你了解吗?
更新时间:2019-11-04 点击次数:2554

    培养细胞基本形态

    培养细胞zui常见的是贴附于平面支持物细胞。在一般光镜下生存中的细胞是均质而透明的,结构不明显。细胞在生长期常有1-2 个核仁。在细胞机能状态不良时,细胞轮廓会增强,反差增大。若胞质中时而出现颗粒、脱滴和腔泡等,表明细胞代谢不良。体外培养细胞根据它们在培养器皿是否能贴附于支持物上生长特征,可分为贴附型生长和悬浮型生长两大类。贴附型细胞在培养时能贴附在支持物表面生长。如羊水细胞为贴附型细胞,常表现为成纤维型细胞和上皮细胞生长。悬浮型细胞在培养中悬浮生长。

    哺乳动物细胞冷冻保存

    主要目的:

    (1)保存种子细胞,以便随时取用。这是保存细胞的zui主要目的。

    (2)减少细胞被微生物污染的危险性。

    (3)减少细胞之间交叉污染的危险性。

    (4)减少细胞因传代培养而引起的遗传变异和形态改变。

    (5)避免有限细胞系出现衰老或恶性转化。

    (6) 降低人力和物力。

    冷冻保存细胞的解冻与复苏要点:慢冻快融

    (1)快速解冻。冻存细胞从液氮中取出后,应立即放入 37℃水浴中,轻轻摇动冷冻管,使其在 1 分钟内全部融化(不要超过 3 分钟)。

    (2)解冻操作过程动作要轻。由于冷冻保存过的细胞变得非常脆弱,不仅解冻速度要快,而且动作要轻。一般情况下,解冻后的细胞可直接接种到含*生长培养液的细胞培养瓶中直接进行培养(1ml 冻存细胞液加入到 25-30ml 新鲜*培养液中),24 小时后再用新鲜*培养替换旧培养液,以去除 DMSO。如果,细胞对冷冻保护剂特别敏感,那么,解冻后的细胞应先通过离心去除冷冻保护剂,然后再接种到含*生长培养液的培养瓶中。

    特别注意:

    (1)解冻时务必注意安全,预防冷冻管爆裂。,要带手套,用镊子将细胞冷冻管从液氮中取出,放入 37℃水浴中。切不可直接用手,以免冻伤。

    (2)冷冻管在水浴中解冻时,要将冻存管盖子拧紧,确定拧紧后再投入水浴锅中,注意液面不可超过冻存管盖面,否则,易发生污染。

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