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人胰岛素(Insulin)说明书
更新时间:2011-10-20 点击次数:1913

人胰岛素(Insulin)酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围:                                                                                                                    96T
0.5mU/L – 16mU/L
 
使用目的:
本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中胰岛素(Insulin)含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人胰岛素(Insulin)水平。用纯化的人胰岛素
(Insulin)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入胰岛素(Insulin),再
与 HRP 标记的胰岛素(Insulin)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后
加底物TMB显色。TMB在 HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄
色。颜色的深浅和样品中的胰岛素(Insulin)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度
(OD值),通过标准曲线计算样品中人胰岛素(Insulin)浓度。  
试剂盒组成  
1  30倍浓缩洗涤液  20ml×1瓶  7  终止液  6ml×1 瓶
2  酶标试剂  6ml×1瓶  8  标准品(32mU/L)  0.5ml×1 瓶
3  酶标包被板  12 孔×8条  9  标准品稀释液  1.5ml×1 瓶
4  样品稀释液  6ml×1瓶  10  说明书  1 份
5  显色剂A 液  6ml×1瓶  11  封板膜  2 张    
6  显色剂B液  6ml×1/瓶  12  密封袋  1 个
标本要求  
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤
1.  标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
16mU/L  5 号标准品  150µl的原倍标准品加入150µl标准品稀释液
8.0mU/L  4 号标准品  150µl的5 号标准品加入150µl标准品稀释液
4.0mU/L  3 号标准品  150µl的4 号标准品加入150µl标准品稀释液
2.0mU/L  2 号标准品  150µl的3 号标准品加入150µl标准品稀释液
1.0mU/L  1 号标准品  150µl的2 号标准品加入150µl标准品稀释液
 
 
2.  加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同) 、标准孔、
待测样品孔。 在酶标包被板上标准品准确加样50µl, 待测样品孔中先加样品稀释液40µl,然后再加待测样品10µl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽
量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.  温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。      
4.  配液:将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用
5.  洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此
重复 5次,拍干。
6.  加酶:每孔加入酶标试剂50µl,空白孔除外。  
7.  温育:操作同3。
8.  洗涤:操作同5。
9.  显色:每孔先加入显色剂A50µl,再加入显色剂B50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色
15 分钟.
10.  终止:每孔加终止液 50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色) 。
11.  测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD 值) 。 测定应在加终止
液后 15分钟以内进行。
操作程序总结:
 
 
计算
    以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的
OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD 值计算出标
准曲线的直线回归方程式, 将样品的OD值代入方程式, 计算出样品浓度, 再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。  
注意事项
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未
用完,板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间
控制在5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD 值
大于标准品孔*孔的OD 值) ,请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计
算时请zui后乘以总稀释倍数(×n×5) 。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物请避光保存。
7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9.本试剂不同批号组分不得混用。
10.  如与英文说明书有异,以英文说明书为准。
保存条件及有效期
1.试剂盒保存: ;2-8℃。
2.有效期:6个月
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Human          Insulin
 
FOR RESEARCH USE ONLY
 
Assay range:0.5mU/L -16 mU/L                                96 determinations
Purpose
This kit allows  for  the determination of  Insulin concentrations  in Human serum, cell
culture supernates and other biological fluids
 
Principle of the assay
The kit assay Human Insulin level in the sample, use Purified Human Insulin antibody to
coat microtiter  plate  wells, make  solid-phase  antibody,  then  add  Insulin  to  wells,  Combined
Insulin  antibody  which  With  HRP  labeled  goat  anti-Human  become  antibody  -  antigen  -
enzyme-antibody  complex,  after  washing  Compley,  Add  TMB  substrate  solution,TMB
substrate becomes blue color At HRP enzyme-catalyzed, reaction is terminated by the addition
of  a  sulphuric  acid  solution  and  the  color  change  is  measured  spectrophotometrically  at  a
wavelength of 450 nm. The concentration of Human Insulin in the samples is then determined
by comparing the O.D. of the samples to the standard curve.
Materials provided with the kit
1  wash    solution  20ml×1bottle  7  Stopp Solution  6ml×1 bottle
2  HRP-Conjugate reagent  6ml×1 bottle  8  Standard (32mU/L)   0.5ml×1 bottle
3  Microelisa stripplate  12well×8strips  9  Standard diluent  1.5ml×1bottle
4  Sample diluent  6ml×1 bottle  10  Instruction  1
5  Chromogen Solution A  6ml×1 bottle  11
Closure plate
membrane
2
6  Chromogen Solution B  6ml×1 bottle  12  Sealed bags  1
Specimen requirements
RD 1.  extract  as  soon  as  possible  after  Specimen  collection,and  according  to  the  relevant
literature,  and  should  be  experiment  as  soon  as  possible  after  the  extraction.  If  it  can’t,
specimen can be kept in -20 ℃ to preserve, Avoid repeated freeze-thaw cycles.
2.  Can’t detect the sample which contain NaN3, because NaN3 inhibits HRP active.
Assay procedure
1.  Dilute and add sample:Dilute Original density Standard as follow table:
16mU/L
5 Standard  150µl Original density Standard+150µl Standard diluent
8mU/L
4 Standard  150µl 5 Standard+150µl Standard diluent
4mU/L
3 Standard  150µl 4 Standard+150µl Standard diluent
2mU/L
2 Standard  150µl 3 Standard +150µl Standard diluent
1mU/L
1 Standard  150µl 2 Standard +150µl Standard diluent
2.add  sample:Set  blank  wells  separay  (blank  comparison  wells  don’t  add  sample  and
HRP-Conjugate reagent, other each step operation is same). testing sample well. add Sample
dilution  40µl  to  testing  sample  well,  then  add  testing  sample  10µl  (sample  final  dilution  is
5-fold), add sample to wells , don’t touch the well wall as far as possible, and Gently mix.
3.Incubate: After closing plate with Closure plate membrane ,incubate for 30 min at 37℃.
4.Configurate  liquid: 30-fold  (or 20-fold) wash solution diluted 30-fold  (or 20-fold) with distilled
water and reserve.
5.washing:Uncover Closure plate membrane, discard Liquid, dry by swing, add washing buffer
to every well, still for 30s then drain, repeat 5 times, dry by pat.
6.add enzyme:Add HRP-Conjugate reagent 50µl to each well, except    blank well.  
7.incubate:Operation with 3.
8.washing:Operation with 5.
9.color:Add Chromogen Solution A 50ul and Chromogen Solution B  to each well, evade  the
light preservation for 15 min at 37℃
10.Stop  the  reaction:Add  Stop  Solution50µl  to  each well,  Stop  the  reaction(the  blue  color
change to yellow color).
11.assay:take blank well as zero , Read absorbance at 450nm after Adding Stop Solution and within 15min.
Steps description
Standard, Sample diluent
 
 
Add Standard, Sample diluent, incubate for 30 min at 37℃.
 
 
Wash 5 time,Add HRP-Conjugate reagent, incubate for 30 min at 37℃.
 
 
Wash 5 times,Add Chromogen Solution A and B, incubate for 30 min at 37℃.
 
 
Add Stopp Solution
 
 
Read absorbance at 450nm within 15 min
 
 
calculate
Calculate
Take  the  standard  density  as  the  horizontal,  the OD  value  for  the  vertical  ,draw  the
standard  curve on graph paper, Find out  the  corresponding density according  to  the  sample
OD value by the Sample curve, multiplied by the dilution multiple, or calculate the straight line regression equation of the standard curve with the standard density and the OD value ,with the
sample OD value in the equation, calculate the sample density, multiplied by the dilution factor,
the result is the sample actual density.
Important notes
1.  The kit  takes out  from  the  refrigeration environment should be balanced 15-30 minutes  in
the room temperature, ELISA plates coated if has not use up after opened, the plate should
be stored in Sealed bag.
2.  washing  buffer  will  Crystallization  separation,  it  can  be  heated  the  water  helps  dissolve
when dilute . Washing does not affect the result.
3.  add  Sample  with  sampler  Each  step,  And  proofread  its  accuracy  frequently,  avoids  the
experimental error. add sample within 5 min, if the number of sample is much , recommend
to use Volley .
4.  if the testing material content is excessively higher (The sample OD is bigger than the first
standard well ),please dilute Sample (n-fold), Please diluente and multiplied by the dilution
factor.(×n×5).
5.  Closure plate membrane only limits the disposable use, to avoid cross-contamination.
6.  The substrate evade the light preservation.
7.  Please  according  to  use  instruction  strictly,  The  test  result  determination must  take  the
microtiter plate reader as a standard.
8.  All samples, washing buffer and each kind of  reject should according  to  infective material
process.
9.  Do not mix reagents with those from other lots.
 
Storage and validity
1.Storage:    2-8℃.
2.validity:  six months

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