一、抗原修复不充分

原因：甲醛固定导致抗原表位交联封闭，或修复液pH值错误、时间不足。

解决：

使用pH 6.0柠檬酸盐缓冲液（多数抗体适用）。

高压修复（121℃, 2~3分钟）优于微波修复。

二、一抗问题

原因：浓度过低、孵育时间过短或抗体失效。

解决：

进行浓度梯度测试（如1:50~1:400）。

设立阳性对照验证抗体活性。

三、组织固定不当

原因：固定时间过长（>48小时）或固定液浓度过高。

解决：

推荐10%中性福尔马林固定6~24小时。

及时固定（大标本需切开）。

四、操作失误

原因：组织干燥、切片过厚或试剂覆盖不全。

解决：

保持切片湿润，厚度控制在3~4μm。

使用DAKO笔圈画组织防止液体流失。

五、DAB显色异常

原因：显色时间过长或DAB变质。

解决：

现配现用DAB，显色时间控制在1~5分钟。

显微镜下监控显色过程。

六、其他因素

内源性酶未阻断：用3% H2O2处理10分钟（室温）。

脱钙组织处理：改用EDTA脱钙液避免抗原破坏。

若问题持续，建议检查抗体特异性或重新取样。