人抗呼吸道合胞病毒抗体ELISA试剂盒显色重要性及样品处理
更新时间：2013-05-07 点击次数：1408
人抗呼吸道合胞病毒抗体ELISA试剂盒显色的重要性
显色是ELISA中的zui后一步温育反应，此时酶催化无色的底物有色的产物。反应的温度和时间仍是影响显色的因素。在一定时间内，阴性孔可保持无色，而阳性孔则随时间的延长而呈色加强。适当提高温度有助于加速显色进行。在定量测定中，加入底物后的反应温度和时间应按规定力求准确。定性测定的显色可在室温进行，时间一般不需要严格控制，有时可根据阳性对照孔和阴性对照孔的显色情况适当缩短或延长反应时间，及时判断。 OPD底物显色一般在室外温或37℃反应20-30分钟后即不再加深，再延长反应时间，可使本底值增高。OPD底物液受光照会自行变色，显色反应应避光进行，显色反应结束时加入终止液终止反应。OPD产物用酸终止后，显色由橙黄色转向棕黄色。
TMB受光照的影响不大，可在室温中置于操作台上，边反应观察结果。但为保证实验结果的稳定性，宜在规定的适当时间阅读结果。TMB经HRP作用后，约40分钟显色达，随即逐渐减弱，至2小时后即可*消退至无色。TMB的终止液有多种，叠氮钠和SDS等酶抑制剂均可使反应终止。这类终止剂尚能使蓝色维持较长时间（12-24小时）不褪，是目视判断的良好终止剂。此外，各类酸性终止液则会使蓝色转变成黄色，此时可用特定的波长（450nm）测读吸光值。
人抗呼吸道合胞病毒抗体ELISA试剂盒检测中样品的处理
1．细胞培养物上清：
细胞培养物于室温1000g，离心10分钟后收集上清，并将标本保存于-20℃，且应避免反复冻融。
2．血清：
标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g，4℃离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。
3．血浆：
可用EDTA或肝素作为抗凝剂标本采集后30分钟内于2-8℃,1000g离心15分钟，或将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。
4．尿液：
无菌收集取初尿，离心除去沉淀物，即可用于检测，要长期保存尿样，可以加入0.05％的NaN3在4-8℃保存，或加入尿样冰冻保护液放入-20℃冰箱长期保存。
5．组织匀浆：
将组织标本先用PBS洗涤，除去多余血液，匀浆化后放在PBS于-20℃放置过夜，再经过二次反复冻融破膜，5000g，4℃离心5分钟，取上清即可检测。
注：取样和样品处理过程中，防止有毒物质对操作人员的危害，要采取相应的保护措施。
