在动物检验检疫中核酸检测技术大多数无需要求定量,所以在这只作简单介绍。核酸检测的定量化在人医临床和动物疫病基础研究中应用较多,可用于病情评估、疗效预测和观察及预后判断、疫病的病理分析,具有一定的应用价值。核酸的定量检测一般有以下两种方法。
(1)定量的核酸杂交技术 此类技术以分支链DNA信号放大技术(branched DNA signal amplification assay,bDNA)为典型代表,bDNA技术系美国Chiron公司的,属于一种改良的核酸杂交技术,它定量的基本原理是样品中被检的特异性核酸越多,结合的探针也就越多,导致信号越强。此技术zui关键的部分是信号很强的探针,因此和其他核酸杂交技术相比,bDNA技术的灵敏度很高。国内已有一些医院采用bDNA技术进行HBV基因和HCV基因的定量检测。
(2)定量的PCR技术 此类技术有终点稀释法、荧光PCR、竞争PCR、PCR-ELISA等模式。现在zui常用的是前面所述的荧光PCR技术。它定量的基本原理是样品中被检的特异性核酸越多,荧光信号突破临界值所需的扩增循环数(即Ct值)越小。