近期恒远经常接到客户的:同一条件下,除了测的指标不一样,为什么有张膜显影,有张未显影???
上海恒远技术分析:在同一条件下,如果一张膜显影,一张膜未显影,可以逐一查找原因:
1、你是否两张膜上都设有阳性对照?如果有,一张膜有信号,一张没信号,可能是操作过程中有问题(可能原因是(1)、你结合底物会不会有问题,即没有充分结合好,或者结合时间太短,(2)、你要确定两张膜都是用新的底物反应液,(3)、就是没有信号的膜会不会压片时间太短,如果使用仪器扫片就不存在这种问题,)所以原因比较多,你只能逐一排查。
2、如果没有设对照,这个问题就更复杂,而且解决起来也不科学。同时,要控制两个膜条件*一样是很困难的。即使你是同时做的两个,那一定有一个先上样,一个后上样,而且你跑胶的时候会发现,两块胶上的条带速度肯定是不一样的,转膜两个膜放的位置也肯定不一样,等等,也许这些小问题都不能导致你压片不出条带,我只是想说,两个条件不可能*相同,western blot实验就是重复性比较差,所以一个出一个不出,这样是正常的。