欢迎访问上海恒远生物科技有限公司网站

当前位置:主页 > 技术文章 > ELISA法细胞凋亡检测操作步骤

技术文章

Technical articles
ELISA法细胞凋亡检测操作步骤
更新时间:2014-09-16 点击次数:1459

细胞凋亡的发生是由于钙-镁依赖性核酸酶进入核小体间切割DNA,产生180bp~200bp或其倍数的核小体片段。而核小体由于与组蛋白H2A、H2B、H3和H4形成紧密复合物而不被核酸内切酶切割。采用双抗体夹心酶免疫法,应用小鼠抗DNA和抗组蛋白的单克隆抗体,与核小体片段形成夹心结构,可特异性检测细胞溶解物中的核小体片段。

常见样本以及基本操作方法:

1.收集细胞,离心后,用200µl溶细胞缓冲液重新悬浮,室温下作用30min。(培养细胞的上清液、血浆和血清都可作为检测样本)

2.取样品离心后(1 000r/min,10min),吸取20µl上清液,加入链霉亲合素包被的培养板孔中。

3.加入80µl免疫反应试剂含抗-DNA-POD、抗组蛋白-生物素及温育缓冲液(按1︰1︰18混合),室温下孵育2h(置摇床上,250r/min)。

4.取上清,用300µl温育缓冲液洗涤3次,小心移去洗涤液。

5.加入100µl底物缓冲液,室温下孵育使颜色变化至适合(置摇床上)。

6.尽快作比色分析(10min~20min内),用底物缓冲液作空白对照,以波长405nm,参考波长492nm进行检测。

版权所有 © 上海恒远生物科技有限公司 备案号:沪ICP备11004148号-3 技术支持:化工仪器网 管理登陆 sitemap.xml

在线客服 联系方式

服务热线

13564766906

19821325306

扫一扫,添加微信

化工仪器网

推荐收藏该企业网站