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技术详解:免疫血清纯化抗体操作
更新时间:2015-03-30 点击次数:1709

 

疫血清 (immune serum)亦称抗血清。含有抗体的血清制剂。种类很多,包括抗毒素、抗菌血清、抗病毒血清、抗Rh血清等。关于免疫血清纯化抗体的详细操作步骤我公司专业技术提供专业的技术指导。如下:

1. 剪取一小条0.45 μm 的硝酸纤维膜,置于1.5ml eppendorf 管中,浸没于1 ml
1 mg/ml 的抗原溶液中,5 min。
2. 取出膜,置于滤纸上干燥。
3. 将膜放置于装有1 ml Buffer A 的eppendorf 管,轻轻震荡混匀30 min。
4. 移去Buffer A,用新鲜的Buffer A 洗一次,将膜浸没于0.8-1 ml 相应的抗血
清中,1-2 h, 于混匀器上轻轻震荡混匀。
5. 移去血清,用PBS 洗膜,4 次,每次5 min。
6. 洗脱抗体
新配置100 mM 甘氨酸(pH 2.5)抗体洗脱液,将膜置于洗液中,手轻摇
混匀2 min,迅速将洗液转移至装有100 μl 1 M Tris(pH 8.0)中和,使抗体
复性。第1 次洗脱用400 μl 抗体洗脱液,第2,3 次用200 μl。
7. 往洗脱下来的液体中加入100 μl Buffer A 以稳定抗体,并分装成30 μl 每管,
于-20℃保存。
注:所有步骤均在室温完成。

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