三月份东南大学张同学在我司购买了小鼠干扰素系列试剂盒。他自我介绍是实验新手,之前没有做过ELISA等相关实验。根据我司试剂盒提供的说明书操作2加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。咨询怎样确定合适血清的稀释梯度?
我司根据张同学没有做过相关实验经验特此给客户去提供了详细的技术指导并通过我司销售给以客户文字答复。
现在实验室普遍采用方阵滴定法。即取不同的抗原抗体梯度做交叉实验,比如横向包被抗原,竖向就用不同浓度抗体。抗原浓度范围可以从500ng/孔开始逐步稀释,抗体的开始稀释倍数则要参考生产商的使用说明书. 血清用1%BSA稀释,如果血清效价高,可以稀释20000倍测定,一般都会做多个梯度,如稀释1000,2000,4000,8000,16000倍。
恒远预祝张老师实验成功!