猪瘟（ＣＳＦ）是一种急性热性传染病，是zui常见的重要猪病之一。对猪瘟的成功控制主要依赖于疫苗免疫，因此，疫苗免疫效果的优劣对猪瘟防控起了决定性作用。猪瘟抗体水平的检测是疫苗免疫
效果评价的主要方法。本课题组建立了猪瘟抗体间接ＥＬＩＳＡ检测方法，并将其组装成试剂盒，对试剂盒的批间、批内稳定性和保存期等进行了研究。
一、材料与方法
1)猪瘟抗体间接ＥＬＩＳＡ（简称Ｉ－ＥＬＩＳＡ，下同）试剂盒，由上海恒远生物科技有限公司独立实验室研制，批号为２０１5０3０５、２０１5０4０７、２０１505０９；猪瘟抗体阻断ＥＬＩＳＡ（简称Ｂ－ＥＬＩＳＡ，下同）试剂盒，猪瘟阳性血清１６份和阴性血清９份，猪瘟活疫苗（传代细胞源）。
2)批内稳定性试验:随机抽取同一批次试剂盒中的３件，按照说明书对１６份阳性血清和９份阴性血清血清样本进行检测，比较试剂盒的变异系数。
3)批间稳定性试验:从３个不同批次试剂盒中随机抽取１件，按照说明书对上述１６份阳性血清和９份阴性血清样本进行检测，比较试剂盒的变异系数。
4)保存期试验:随机抽取１２件试剂盒置于２℃～８℃环境中，每隔１个月取出１件对经２倍梯度稀释的标准阳性血清进行检测，直至第9个月。比较不同梯度血清检测结果的变化。
5)ＦＶＮＴ 的符合率:田间采集４７４份猪血清，用猪瘟抗体Ｉ－ＥＬＩＳＡ试剂盒和ＦＶ6)对疫苗免疫猪抗体增长趋势的检测:选取７头猪瘟抗体阴性仔猪，分为免疫组和对照组。免疫组５头，免疫１头份猪瘟活疫苗（传代细胞源）；对照组２头，接种生理盐水。自免疫后的第１天开始，每隔３ｄ对两组动物进行前腔静脉采血，直至第２１__天。２１ｄ后定期采血，直至免疫后的第２１３天。分别用猪瘟抗体Ｉ－ＥＬＩＳＡ 试剂盒和猪瘟抗体Ｂ－ＥＬＩＳＡ试剂盒进行检测。
二、结果
1）批内稳定性试验：同一批试剂盒的批内变异系数均小于１０％，因此说明，该试剂盒具有较好的批内稳定性。
2）批间稳定性结果：不同批次反应板的变异系数zui高为１１％，仍在１５％的可接受范围内，说明该试剂盒具有很好的批间稳定性。
3）保存期试验：随着保存期的延长，梯度稀释的阳性血清ＩＥ值一直维持在一个稳定的范围内，血清效价始终为１２８倍（ＩＥ值≥１０％）。
三、讨论
1.猪瘟抗体Ｉ－ＥＬＩＳＡ试剂盒的稳定性：ＥＬＩＳＡ试剂盒的稳定性是试剂盒质量的重要标准之一。在进行试剂盒生产时，应严格按照已经优化的试验条件进行，保证产品质量的均一性。
2.试剂盒的保存期：保存期是试剂盒质量的另一个重要指标。影响保存期的因素很多，酶标板的热稳定性，酶标二抗、对照血清以及稀释液等均会对zui终的检测结果产生影响。因此，在进行试剂盒研发时应充分考虑上述因素。本试剂盒通过保存期试验证明，在４℃～８℃下保存9个月，不会影响试剂盒的检测结果。为了充分保证试剂盒的有效性，将保存期缩短３个月，即确定试剂盒zui终的保存期为6个月。
3.与ＦＶＮＴ的符合率：虽然猪瘟的诊断方法很多，但是各种技术均存在不同程度的优缺点，各方法之间的相关性研究较少。ＦＶＮＴ 作为检测猪瘟病毒中和抗体的经典方法，是贸易的猪瘟抗体检测方法。中和作用是特异性结合，抗体附着在游离抗原表面，阻止其吸附敏感细胞上，进而阻止穿入细胞复制。因此，中和试验是zui直接反应血清抗病毒效果的方法。根据上述结果，Ｉ－ＥＬＩＳＡ试剂盒与ＦＶＮＴ的符合率可达９２％，在基层大规模普查过程中，能够反映中和抗体水平，为免疫程序的制定和抗体水平的监测提供可靠的数4）对免疫猪血清抗体的动态监测：通过对免疫猪抗体增长趋势的检测结果看出，猪瘟抗体Ｉ－ＥＬＩＳＡ对抗体由阴转阳的检出时间为免疫后的１２～１５ｄ，而Ｂ－ＥＬＩＳＡ试剂盒检测表明在免疫后的１５～２８ｄ陆续由阴性转为阳性。由于Ｉ－ＥＬＩＳＡ 检测的是针对Ｅ２蛋白的所有抗体，而Ｂ－ＥＬＩＳＡ检测的是针对Ｅ２蛋白某一个表位的抗体，在免疫初期由于抗体丰度的不同，导致Ｉ－ＥＬＩＳＡ对阳性抗体的检出要早于Ｂ－ＥＬＩＳＡ。另外，从两种试剂盒检测抗体增长趋势图中可以看出，猪瘟抗体Ｉ－ＥＬＩＳＡ试剂盒可以对不同抗体水平的猪血清进行有效的区分，可以从ＩＥ值上直观的比较两份血清抗体水平的高低。该试剂盒中所采用的标准阳性血清为反复免疫的猪瘟抗体强阳性血清，而待检的免疫血清在免疫后２１３ｄ达到zui高值时，仍不到阳性对照血清ＯＤ值的８０％。因此说明，Ｉ－ＥＬＩＳＡ试剂盒能够在更宽的范围内对抗体水平进行区分。而Ｂ－ＥＬＩＳＡ试剂盒采用的是阻断ＥＬＩＳＡ原理，当抗体达到可以将包被的抗原全部封闭的水平后，就出现了检测平台期。因此，阻断ＥＬＩＳＡ只能在一定范围内对抗体水平的高低进行区分。因此，可根据种群和生产需要等情况选择不同的检测方法。