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上海恒远分享:关于试剂盒实验的操作流程描叙
更新时间:2016-07-13 点击次数:1781

   昨日上午我司吴在询盘的留言上看到有客户咨询关于实验正确步骤是怎样的?在经过一番交流后,我司吴特意整理出实验中的整个操作流程及注意事项与亲们分享:
前期准备工作:
  实验前样本和试剂盒室温平行1小时,如果样本是冻存样本,应提前拿到2-8摄氏度进行解冻(不建议直接室温解冻)
准备好实验所需耗材,蒸馏水(去离子水)。
操作流程描叙:
1,将要进行实验的版孔进行设定好,标准品5个点,每个点设定平行,需要用到10个孔,空白只需1个孔。剩下孔可以做为样本孔
2,稀释标准,准备好5个EP管,然后在每个EP管中加入150微升标准稀释液,编上编码,分别为1,2,3,4,5,在1号管中加入150标准品,用枪头反复吹打10次左右(注意控制幅度不要过大容易产生气泡)如果有涡旋仪可以在涡旋仪上涡旋5秒左右,然后换枪头,在1号管中取150微升加入到2号管,后面过程一次类推。zui后稀释完,前面4个管中每管液体在150微升,5号管为300微升。浓度是从大到小。
3,标准、样本、空白加样:标准是每个浓度点2个孔(做平行),每孔加入50微升,加样过程中注意换枪头,样本孔中每孔加入50微升,加样过程中注意换枪头,空白孔加入50微升蒸馏水。特别要说明的是,标准加样和样本加样尽量控制在15分钟内加完,如果时间拖的太长,会导致前面孔先反应后面孔才开始反应,这样数值偏差过大。加完样后盖上封板膜,至37摄氏度孵育30分钟.
4,洗版,在孵育过程中可以将洗涤液配好,20ml30倍浓缩洗涤液用蒸馏水或者去离子水定容到600ml即可。每孔加入250-300微升的洗涤液(不要漫过版孔),(如果有震荡仪的话,可以讲板子放入震荡仪上5秒左右,然后静止三十秒,没有请忽略次过程)将板子在桌子上晃动5秒左右,然后静置30秒,甩干,拍板。说明:甩干过程尽量要快,1秒内就可以完成,不要慢慢倾斜倒掉液体,直接翻板甩掉液体即可。拍板过程需要在桌子上垫一层吸水纸或者滤纸,版孔朝下拍几下,拍干区别主要看吸水纸和滤纸上没有明显的水渍为完成。
5,每孔加入50微升的酶标试剂,此处在空白孔中不需要加(空白孔为空),孵育30分钟。
6,洗版同步骤4
7,显色,先每孔中加入50微升的显色A液,然后每孔中加入50微升显色B液。避光37摄氏度显色15分钟
8,终止,每孔加入50微升的终止液,注意,加完终止液必须在15分钟内读数,超过时间读数无效。在规定时间内读数都是有效的。
至此,整个实验结束。

   需要额外提醒的是:在做完整个实验过仪器之前,仪器预热半小时,这个计算好时间,也可以直接将仪器一直开着,直到整个实验结束。
  在加液过程中不要使枪头触及到板子底部,一般枪头都悬空,可以将枪头靠在孔边缘,但枪头尖悬空,如果枪头上残留液体看整体多少量,不要吹打下去。特别忌讳在版孔内壁流向版孔。整个加液过程不要产生气泡。(洗涤液除外)

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