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鲎试剂的试验方法
时间:2022-11-01 点击次数:114

鲎的身上流淌着一种十分珍奇的血液。这种血液是淡蓝色的。这种淡蓝色的血液中含铜量很高,而且一遇到细菌就会凝固。利用鲎血液的这种特殊反应,对它进行处理,可以制成一种特殊的检验试剂--"鲎试剂"。鲎试剂可以准确、快速地检测人体内部组织是否因细菌感染而致病;在制药和食品工业中,也可用它对毒素污染进行监测。

细菌内毒素检查法包括两种方法,即凝胶法和光度测定法,后者又包括浊度法和显色基质法。则鲎试剂可分为:凝胶法鲎试剂、动态浊度法鲎试剂、终点浊度法鲎试剂、动态显色法鲎试剂和终点显色法鲎试剂。凝胶法鲎试剂通过与内毒素产生凝集反应的原理来定性检测或半定量内毒素的方法。动态浊度法鲎试剂、终点浊度法鲎试剂、动态显色法鲎试剂和终点显色法鲎试剂则都是定量检测内毒素的

 

选择合适的操作方法与顺序,在鲎试剂的使用过程中尤为重要。在操作过程中要注意以下几点:

(1) 实验室要求洁净、无尘埃流通;检验人员同时注意卫生的保持。在整个使用操作过程中应防止微生物的污染,例如空气的流动,人员的口沫、汗液污染等。

(2) 鲎试剂开启、溶解和配制时应尽量避免将安瓿外瓶壁脏物、瓶壁碎片、砂轮锯屑等异物混入鲎试剂中,避免鲎试剂外损。

(3) 鲎试剂中含有多种蛋白质,用力振摇会产生气泡,一旦起泡难以消除,而影响检测的准确性,所以在整个操作过程中都要轻力以避免因过分震动而引起的误差。

(4) 量取和加样反应物时,一定要加到试管底部接近鲎试液而不接触鲎试液的管壁处。

(5) 生成凝胶的最适pH值为6~8,对于氯化钠注射液葡萄糖注射液(5%,10%)等注射液,不需考虑供试液的pH值,而检查其他制剂时,尤其是一些本身缓冲能力较强或偏酸、碱的供试品,应考虑供试品的pH值。

(6) 使用时要严格控制温度和时间。当鲎试剂一加入内毒素及样品混合液中时反应已开始,并在一定的温度范围内,反应温度越高,反应速率越大;保温时间的增长,也会提高鲎试剂的灵敏度,增加假阳性的发生,导致较大误差。因此,要注意控制温度的变化和保温时间。

(7) 保持实验器具的洁净。每次检验完毕,应及时将玻璃器具充分清洗后于250℃干热灭菌处理,待烤箱温度升至设定的温度后开始计时,干烤至少1h。也可用其他经确证不干扰细菌内毒素的检查的适宜方法。对于塑料、橡胶等不耐热器材可用30%双氧水浸泡4h,用无热原水冲洗,70℃干燥备用。

鲎试剂的贮存

虽然冻干的鲎试剂在常温条件下是相对稳定的,但还是应存放在2℃~8℃下,避免长时间放置在高于25℃的温度条件下导致因贮藏不当、质量下降而引起的检验误差



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