上海恒远本周推出新品——人钙联蛋白ELISA试剂盒，本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中钙联蛋白的含量，且仅用于科研试验中。下面让我们一起了解一下：            

 实验原理：                                                       

    人钙联蛋白ELISA试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人钙联蛋白(calnexin)水平。用纯化的人钙联蛋白(calnexin)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入钙联蛋白(calnexin)，再与HRP标记的钙联蛋白(calnexin)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的钙联蛋白(calnexin)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人钙联蛋白(calnexin)浓度。

计算：
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
试剂盒组成：
封板膜:2片（48）/2片（96）
说明书:1份
密封袋:1个
标准品：   2700ng/L  0.5ml×1瓶   0.5ml×1瓶  2-8℃保存
酶标包被板:  1×48        1×96             2-8℃保存
样品稀释液: 3ml×1瓶       6 ml×1瓶         2-8℃保存
显色剂A液: 3ml×1瓶       6 ml×1瓶         2-8℃保存
显色剂B液: 3ml×1瓶       6 ml×1瓶         2-8℃保存
终止液:     3ml×1瓶       6ml×1瓶          2-8℃保存
浓缩洗涤液:（20ml×20倍）×1瓶   （20ml×30倍）×1瓶   2-8℃保存 

操作步骤：
1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在*、第二孔中分别加标准品100μl，然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从*孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为1800ng/L，1200ng/L ，600ng/L，300ng/L， 150ng/L）。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

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