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本周新品—人钙联蛋白ELISA试剂盒
更新时间:2015-07-20 点击次数:673

上海恒远本周推出新品——人钙联蛋白ELISA试剂盒,本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中钙联蛋白的含量,且仅用于科研试验中。下面让我们一起了解一下:            

 实验原理:                                                       

    人钙联蛋白ELISA试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人钙联蛋白(calnexin)水平。用纯化的人钙联蛋白(calnexin)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入钙联蛋白(calnexin),再与HRP标记的钙联蛋白(calnexin)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的钙联蛋白(calnexin)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人钙联蛋白(calnexin)浓度。

计算:
以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
试剂盒组成:
封板膜:2片(48)/2片(96)
说明书:1份
密封袋:1个
标准品:   2700ng/L  0.5ml×1瓶   0.5ml×1瓶  2-8℃保存
酶标包被板:  1×48        1×96             2-8℃保存
样品稀释液: 3ml×1瓶       6 ml×1瓶         2-8℃保存
显色剂A液: 3ml×1瓶       6 ml×1瓶         2-8℃保存
显色剂B液: 3ml×1瓶       6 ml×1瓶         2-8℃保存
终止液:     3ml×1瓶       6ml×1瓶          2-8℃保存
浓缩洗涤液:(20ml×20倍)×1瓶   (20ml×30倍)×1瓶   2-8℃保存 

操作步骤:
1.标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在*、第二孔中分别加标准品100μl,然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从*孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为1800ng/L,1200ng/L ,600ng/L,300ng/L, 150ng/L)。
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。
5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7.温育:操作同3。
8.洗涤:操作同5。
9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

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