昨日，中国农业大学张同学咨询：ELISA结果阴性值偏高怎么回事？阴性值与抗原、抗体稀释度，尤其是抗体的稀释度有关吗？与不同的酶标板有关吗？

技术答：可能和你底物缓冲液的PH值有关，通常是用 OPD 呈色，我们实验室也有人用 TMD 呈色，也碰过背景值过高的问题，后来检讨造成背景值过高的原因可能为，一是呈色时没有避光，二是底物缓冲液的PH值不对。

一、TMB配置方法: 称取固体 TMB 溶于 DMSO 配成 1mg/ml 液体避光保存 4度
用前要检查其状态，若有凝固，可用手温将其融化。

二、底物缓冲液（Ph5.0）配置方法: 柠檬酸 1.02g，NaHPO4.12H2O 3.68g 溶于100ml水中。