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人β淀粉样蛋白40(Aβ40)ELISA试剂盒

  • 型   号:H-11672
  • 厂商性质:生产厂家
  • 所在地:上海市
  • 价       格:1980

更新时间:2020-07-15    服务电话:13564766906/18221290082

简要描述:人β淀粉样蛋白40(Aβ40)ELISA试剂盒仅供科研使用,定量检测血清、血浆、细胞培养上清液等相关样本中人β淀粉样蛋白42(Aβ42)的浓度。

详细介绍

人β淀粉样蛋白40(Aβ40)ELISA试剂盒说明书(定量)

使用前请仔细阅读说明书。如果有任何问题,请联系我们,我们会给你提供专业的技术服务。

【产品名称】

通用名称:人β淀粉样蛋白42(Aβ42)检测试剂盒(ELISA)

英文名称:Human(Aβ42)ELISA KIT

 

【包装规格】

96人份/盒

 

【预期用途】

仅供科研使用,定量检测血清、血浆、细胞培养上清液等相关样本中人β淀粉样蛋白42(Aβ42)的浓度。

 

【检测原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人β淀粉样蛋白42(Aβ42)水平。用纯化的人β淀粉样蛋白42(Aβ42)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入人β淀粉样蛋白42(Aβ42),再与HRP标记的人β淀粉样蛋白42(Aβ42)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人β淀粉样蛋白42(Aβ42)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人β淀粉样蛋白42(Aβ42)浓度。

 

【试剂盒组成】

1

30倍浓缩洗涤液

20ml×1瓶

7

终止液

6ml×1瓶

2

酶标试剂

6ml×1瓶

8

标准品(320μg/L)

0.5ml×1瓶

3

酶标包被板

12孔×8条

9

标准品稀释液

1.5ml×1瓶

4

样品稀释液

6ml×1瓶

10

说明书

1份

5

显色剂A液

6ml×1瓶

11

封板膜

2张  

6

显色剂B液

6ml×1/瓶

12

密封袋

1个

注意:使用前请检查试剂盒中试剂的标签和数量与表格是否一致

需要但未提供的材料及耗材

  1、酶标仪

2、精密移液器及一次性吸头

3、蒸馏水

4、洗瓶或者自动洗板机

5、37℃水浴锅或恒温箱

6、500ml量筒

7、无粉一次性乳胶手套

 

【储存条件及有效期】

  1、2-8℃保存,切勿冷冻,有效期6个月。

  2、开封使用后,包被微孔板放入带有干燥剂的自封袋中,密闭自封袋,并将全部试剂放回2-8℃冰箱。

 

【适用仪器】

  半自动的酶标仪,如Thermo MK3,或者国产酶标仪。

 

【样本要求】

1.样本类型和采集

血清将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜,然后1000×g离心20 分钟,取上清即可,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
    血浆用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。

细胞培养物上清或其它生物标本:请1000×g离心20分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

注意:检测前,样本中可见的沉淀必须去除。不要使用严重溶血或高血脂的样本。 样本应分装并贮存于-20,以避免人β淀粉样蛋白42(Aβ42)活性的丢失。如果在 24 小时内检测,样本可以 存放在 2 - 8。 避免样本的反复冻融。在检测前,冷冻样本应该缓慢地恢复至室温,轻柔地混匀。

2.样本保存和稳定性

样本在2-8℃条件下,可以储存72h,或者在- 20℃储存6个月。样本收集后,不是一次检测完,请按一次用量分装冻存,避免反复冻融,使用时在室温下解冻,确保样品均匀充分解冻。

 

人β淀粉样蛋白40(Aβ40)ELISA试剂盒操作步骤】

  • 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

160μg/L

5号标准品

150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液

80μg/L

4号标准品

150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液

40μg/L

3号标准品

150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液

20μg/L

2号标准品

150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液

10μg/L

1号标准品

150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

  • 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准孔准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
  • 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   
  • 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
  • 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
  • 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
  • 温育:操作同3。
  • 洗涤:操作同5。
  • 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟.
  • 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
  • 测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

 

 

【操作程序总结】

 

【结果计算】

  以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

 

【产品性能指标】

1、物理性能

试剂盒的各液体组分应澄清透明、无沉淀或者絮状物。微孔板铝箔袋应真空包装,无破损漏气。

2、剂量反应曲线线性

标准品剂量反应曲线相关系数r值,大于等于0.9900。

3、精密度

批内精密度:三组已知的高、中、低浓度样品,进行二十次在同一个板块内精度评估。批内变异系数CV%小于10%。

批间精密度:三组已知的高、中、低浓度样品,进行二十次在不同板块内精度评估。批间变异系数CV%小于15%。

4、检测范围

6μg/L -160μg/L 。

5、灵敏度

最低检出剂量小于1.5μg/L。

6、回收率

三组已知的高、中、低浓度样品,进行五次回收率评估,回收率在85%-115%之间。

7、特异性

本试剂盒识别天然和重组人β淀粉样蛋白42(Aβ42),与结构类似物无交叉。

8、稳定性

2℃-8℃保存,有效期6个月。

 

【注意事项】

1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间Best控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

  • 请每次测定的同时做标准曲线,Best做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔First孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。
  • 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物请避光保存。

7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9.本试剂不同批号组分不得混用。

 

 

【常见问题及解决方法

若实验效果不好,请及时对显色结果拍照,保存实验数据,保留所用板条及未使用试剂,然后 联系我公司技术支持为您解决问题。同时您也可以参考以下资料:

常见问题

可能原因

解决方法

 

标准曲线梯度差

吸液或加液不准

检查移液器及吸头

标准品稀释不正确

稀释标准品时稍微旋转瓶身

洗涤不完全

保证洗涤时间和洗涤次数及每孔的加液量

 

 

显色很弱或无色

孵育时间太短

保证充足的孵育时间

实验温度不正确

使用推荐的实验温度

试剂体积不够或漏加

检查吸液及加液过程,保证所有试剂按顺序足量添加

稀释不正确

酶标记物失活或底物失效

混合酶结合物和底物,通过迅速显色来检查判断

读数数值低

酶标仪设置不正确

在酶标仪上检查波长及滤光片设置

提前打开酶标仪预热

变异系数大

加液不正确

检查加液情况

 

 

背景值高

 

酶标板洗涤不完全

保证每步清洗完全;如果用自动洗板机,请检查所有的出口是否有堵塞;是否使用试剂盒配备的洗涤液

洗液有污染

配制新鲜的洗液

灵敏度低

试剂盒保存不当

按说明书要求保存相关试剂

读数前未终止OD

读数前应在每孔中加入终止液

【生产企业】

企业名称:上海恒远生物科技有限公司

地    址:上海市闵行区闵北路88弄1-17号、18-30号第12幢168室

 


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