Elisa生物试验是一种敏感性高，特异性强，重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存，操作简便，结果判断较客观等因素，已广泛应用在免疫学检验的各领域中。ELISA检测试剂盒适用于体外定性检测人血清或血浆中的抗人类戊型肝炎(HEV)病毒 IgM 抗体ELISA检测。

在实验中，样品的制备也是非常重要的，操作不好可能会影响实验结果，到底该怎么制备样品呢？接下来小编就带你看看ELISA样品制备的方法吧！

1.细胞培养物上清液

①将培养基移至离心管， 4℃， 1,500 rpm 离心 10 分钟；
②立即进行上清液的分装（血清）并在 -80℃ 下保存样品，尽可能减少反复冻融次数。

2.细胞提取物

①将组织培养板放置在冰上；
②吸出培养基并用预冷PBS 轻轻洗涤细胞一次；
③吸出 PBS ，加入100 mm 培养板加入0.5ml*提取缓冲液；
④收集细胞至在倾斜板中，然后移至经过预冷的离心管中；
⑤短暂涡旋后在冰上孵育 15-30 分钟；
⑥在 4℃ 下13,000 x rpm 离心 10 分钟，沉淀不溶性内容物；
⑦将上清液（这里是指可溶性细胞提取物）分装至预冷的离心管中，并于 -80℃ 保存，尽可能减少反复冻融次数。

3.条件培养基

①将细胞接种到*（含血清）生长培养基中，使细胞增殖达到一定的融合率；
②弃去培养基，数毫升预热PBS 小心洗涤，重复洗涤步骤；
③弃去PBS 洗涤液并小心加入无血清培养基；
④孵育 1-2 天；
⑤将培养基移至离心管， 4℃ 1,500 rpm 离心 10 分钟；
⑥立即分装上清液（血清）并在 -80℃ 下保存样品，尽可能减少反复冻融次数。

4.乳汁

①收集样品并在 4℃ 下以 10,000 x g 离心 2 分钟；
②分装上清液并在 -80℃ 下保存样品，尽可能减少反复冻融次数。

5.血浆

①将全血收集到含抗凝剂的管中，例如 BD 抗凝真空采血管或添加 0.1M 柠檬酸钠至 1/10 终体积；
②4℃ 3,000 rpm 离心 10 分钟；
③立即分装上清液（血浆）并在 -80℃ 下保存样品，尽可能减少反复冻融次数。

6.尿液

①收集样品并在 4℃ 下以 10,000 x g 离心 2 分钟；
②等分上清液（血清）并在 -80℃ 下保存样品，尽可能减少冻融循环次数。

7.唾液

①收集样品并在 4℃ 下以 10,000 x g 离心 2 分钟；
②立即分装上清液（血浆）并在 -80℃ 下保存样品，尽可能减少反复冻融次数。

8.血清

①将全血收集到未经处理的测试管中，或者到不含抗凝剂的管中，如 BD 血清用真空采血管；
②在室温下连续孵育 20 分钟；
③4℃ 3,000 rpm 离心 10 分钟；
④立即分装上清液（血浆）并在 -80℃ 下保存样品，尽可能减少反复冻融次数。

9.组织提取物

①用干净的工具解剖组织，best好在冰上、尽快进行，以防止被蛋白酶降解；
②将组织置于圆底的微量离心管中，并浸入液氮中进行“速冻”，将样品保存在 -80℃ 下以便后续使用或放置在冰上进行直接匀浆；
③对于约 5 mg 的组织片，可向管中添加约 300 μl *提取缓冲液（查看细胞/组织提取缓冲液配方），然后用电动匀浆器匀浆；
④清洗刀片两次，每次清洗使用 300μl *提取缓冲液，然后在 4℃ 下维持恒定搅拌 2 小时（例如置于冷室中的回旋振荡器上）；
⑤4℃ 13,000 x rpm 离心 20 分钟。置于冰上，将上清液（这里是指可溶的蛋白质提取物）分装至新、预冷的管中并在 -80℃ 下保存样品。尽可能减少反复冻融次数。

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